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2022/05/02

全血からわずか15分でPBMCを調製「SepMate-50」・「SepMate-15」

  • 細胞分離

全血から単核球(PBMC)分離の新定番

密度勾配遠心による全血からの単核球(PBMC)の回収では通常、比重液の上にサンプルを慎重に重層し、ブレーキなしで約30分遠心分離してから目的の層の細胞を慎重に回収し洗浄するため、時間と手間がかかるというのが常識でした。
STEMCELL Technologies社の密度勾配遠心専用チューブ「SepMate™」はチューブ内部に特殊な仕切板を挿入しており、リンパ球分離溶液「Lymphoprep™」の上に全血(ヒト末梢血)を容易に重層することができるため作業の習熟が必要なく、PBMCを簡便かつ短時間で回収することができます。
SepMate™とリンパ球分離溶液「Lymphoprep™」を併用することで注意すべきポイントが明確になり、一貫したサポートが可能です。
(更新:2022年5月12日)

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SepMateとは

末梢血から密度勾配溶液で密度勾配遠心(比重遠心)で単核球を分離する際、通常のチューブの代わりに「SepMate™」を使用すると、単核球の回収がデカンテーションだけの非常に簡便かつ短時間な操作で終了します。適切な比重液さえ使用すれば、ヒト以外の動物にも適用可能。細胞分離前のサンプル調製などに最適です。

さらに、比重遠心による細胞分離試薬「RosetteSep™」と組み合わせて使用すれば、比重遠心後にデカンテーションするだけでT細胞やB細胞など目的の細胞集団を約25分で簡便に回収できます。

SepMate™には2種類のサイズがあり、SepMate™-50は 4 - 17 mLの全血、SepMate™-15は 0.5 - 5 mLの全血からの末梢血単核球の回収に利用できます。

SepMateの特長

  • 比重液に血液を重層する操作が簡便
     Lymphoprep™の液面を気にせず血液を重層可能
  • 遠心時にブレーキOFFの必要なし
     わずか10分、1200 x gの遠心でOK
  • 遠心後はデカンテーションだけで末梢血単核球(PBMC)を回収
     ピペットで「注意深く回収する」操作は不要
  • cGMP準拠製造品
     滅菌済み、コンタミフリーで安心
  

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Lymphoprepとは

Lymphoprep™は、末梢血、臍帯血、骨髄から細胞密度の違いを利用して単核細胞(MNC)を分離するのに適した密度勾配溶液(比重液)です。
顆粒球と赤血球は単核細胞よりも密度が高いため、遠心分離中にLymphoprep™の層に沈殿します。
Lymphoprep™は、Ficoll-Paque™と同じプロトコルで使用でき、SepMate™と一緒に使用できます。

Lymphoprepの仕様

  • 比重: 1.077 ± 0.001 g/mL
  • 主成分: Polysaccharide(5.7% w/v)、Sodium diatrizoate(9.1% w/v)
  • エンドトキシンテスト済み(通常 0.13 EU/mL以下)
  • オートクレーブ滅菌済み
  • GMP および ISO13485に準拠し製造

SepMateとLymphoprepのプロトコル 操作概要

PBMC調製の手順

SepMate™を用いてヒトPBMCを回収するプロトコルの概要です。
SepMate™に比重液Lymphoprepを添加。
ヒト全血(末梢血)を重層したのち、遠心1200 x g, 10分で単核球を分離できます。

詳しくは製品添付文書 をご参照ください。
  

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SepMateの動画マニュアル

わずか15分で、どなたでも簡単にPBMCを分離する方法をご確認ください。(所要時間 1:46)

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SepMateのデータ

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SepMate™-15の使用の有無でMNCの回収率に有意差はない
SepMate™-15を使用(オレンジ色)または不使用(濃い灰色)の密度勾配遠心により濃縮した、採血0、24、48時間後の単一サンプルからのMNCの回収率を示しています。

その他のデータは、学会発表ポスター をご覧ください。

ヒト以外の動物種での使用実績

SepMate™はヒト以外の動物種でも、PBMCの調製のために使用されてきました。これまでにサル(非ヒト霊長類)1,2、ブタ3、イヌ4、ウマ5、ヤギ6などで報告されています。各動物種に適した密度の比重液をご利用ください。

文献

  1. Yacoob C, Lange MD, Cohen K, Lathia K, Feng J et al. (2018) B cell clonal lineage alterations upon recombinant HIV-1 envelope immunization of rhesus macaques. PLoS Pathog 14(6): e1007120.
  2. Termini JM, Magnani DM, Maxwell HS, Lauer W, Castro I et al. (2017) Simian T Lymphotropic Virus 1 Infection of Papio anubis: tax Sequence Heterogeneity and T Cell Recognition. J Virol 91(20).
  3. Dhakal S, Goodman J, Bondra K, Lakshmanappa YS, Hiremath J et al. (2017) Polyanhydride nanovaccine against swine influenza virus in pigs. Vaccine 35(8): 1124–31.
  4. Gibbons N, Goulart MR, Chang Y-M, Efstathiou K, Purcell R et al. (2017) Phenotypic heterogeneity of peripheral monocytes in healthy dogs. Vet Immunol Immunopathol 190: 26–30.
  5. Korovina DG, Yurov KP, Alexeenkova S V, Savchenkova EA & Savchenkova IP. (2017) Characterization of multipotent mesenchymal stem cells isolated from equine umbilical cord blood. Russ Agric Sci 43(3): 262–5.
  6. Baliu-Piqué M, Verheij MW, Drylewicz J, Ravesloot L, de Boer RJ et al. (2018) Short Lifespans of Memory T-cells in Bone Marrow, Blood, and Lymph Nodes Suggest That T-cell Memory Is Maintained by Continuous Self-Renewal of Recirculating Cells. Front Immunol 9: 2054.

ユーザーの声

SepMate™を使用した海外研究者の声をご紹介します。

・ヒトおよびチンパンジー血液からのPBMC分離
 Hugo Hilton, Stanford University
 「SepMate™-50は明らかにシンプルなテクノロジーによって、研究室に共通した問題を解決します。時間の節約と、PBMC分離不良によるサンプル損失の低減が可能になりました。従来のフィコール分離と同数のNK細胞を回収できます。」

 詳しくは:Biocompare

・PBMC分離
 Esperanza Perucha, PhD, Academic  Rheumatology King’s College London, UK
 「昨日SepMate™チューブをテストしましたが、それらは…素晴らしく機能しました!同じサンプルを標準プロトコルで並行して実施しましたが、細胞回収率は同じでした(もちろん4分の1の時間で)。」


SepMateとLymphoprepのお得なセット

PBMCをもっと簡便・確実に分離したいと思ったことはありませんか?
SepMate™ Medium Kitは、簡便、確実かつ迅速なPBMCを回収できるSepMate™と、回収時に用いる密度比重液Lymphoprep™のセット品です。
それぞれを単品購入するよりもお得に購入できます。
SepMate™-15 Medium Kit
商品コード:ST-86415-LYM
SepMate™-15 100本入(ST-86415)
Lymphoprep™ 500 mL x 1本(ST-07851)
SepMate™-50 Medium Kit
商品コード:ST-86450-LYM
SepMate™-50 100本入(ST-86450)
Lymphoprep™ 500 mL x 6本(ST-07861)

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※ フリーサンプルは、1研究室あたり1点とさせていただきます
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