ラーニングコーナー
2021/05/24
エンドトキシンの測定といえばCharles River社の「Endosafe® 」に決まり！
- 微生物・エンドトキシン測定
このサイトではCharles River社 エンドトキシン試験システムの概要や製品の使用手順、および皆様からよくいただくご質問をまとめています。ユーザーの皆様に役立つ情報を随時更新していきますので、日々の業務にぜひお役立てください！
Endosafe nexgen-PTSの導入を検討されているお客さま向けに、評価・検証用としてデモ機の2週間無料貸出(※)しております。
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Charles River社のエンドトキシン試験システム
エンドトキシンとは、グラム陰性菌の細胞壁を構成するリポ多糖類（LPS）です。血液中へのごく微量の混入で発熱を引き起こす生理活性物質のため、生体内に直接導入される医薬品や器具に対するエンドトキシンの残存は厳しく管理されています。
1964年にカブトガニの血球抽出物（Limulus amebocyte lysate; LAL）がエンドトキシンの存在下で凝集・凝固する現象が発見され、LAL試薬を用いたエンドトキシン試験法が開発されました。カブトガニから抽出したLALはリコンビナントのLALに比べてグラム陰性菌の属（あるいは種）間での凝集・凝固反応の差が少ないため、Charles River社のエンドトキシン試験システムではカブトガニから抽出したLALを使用しています。
Charles River社のエンドトキシン試験システム（Endosafe®）はすべてUS FDAの認可を取得しています。さらに、日本薬局方収載のエンドトキシン試験に適合した製品や、約15分で測定可能な迅速試験システムなど幅広いエンドトキシン測定法に対応していますので、ご要望に合わせて最適な製品をご選択ください。
製品紹介（LAL試薬）
LAL試薬
Charles River社 のゲル化法、比濁法および比色法各製品は、日本薬局方に収載されているエンドトキシン試験法に適用可能な製品です。
US FDAの認可も取得しています。下記の表をご参考にしていただき、検出したいエンドトキシン濃度やサンプルに合わせてお選びください。
比濁法
ライセート試薬のゲル化に伴う濁度の変化を測定することにより、被験試料中のエンドトキシン濃度を測定する方法です。濁度は吸光度または透過率で示されます。高感度測定（0.005EU/mL）に対応した製品もございます。
LAL（比濁法/ゲル化法)マルチタイプ各種（比濁法/ゲル化法の両方に使用できます）
LAL（高感度比濁法）各種
比色法
エンドトキシンとライセート試薬との反応により発色合成基質から遊離される発色基の量を、吸光度または透過率で測定することでエンドトキシンを定量する方法です。発色基の量は吸光度または透過率で示されます。比色法はカイネティック比色法とエンドポイント比色法に分けられます。
・カイネティック比色法
エンドトキシン濃度と反応液が、あらかじめ設定された吸光度または透過率に達するまでに要する時間または発色の経時変化率との間の容量反応関係に基づく方法です。
Endochrome-K（比色法LAL試薬キット）各種
・エンドポイント比色法
エンドトキシン濃度と一定反応時間後における発色基の遊離量との間の用量反応関係に基づく反応です。
比色エンドポイント法LAL試薬キット
ゲル化法
エンドトキシンの存在によるライセート試薬の凝固反応に基づいて、エンドトキシンを検出する方法です。ゲル化試薬を入れた試験管を37℃・60分間インキュベートしてゲル化を判定します。ゲルが崩れなければ陽性、ゲルが形成されなければ陰性と判断します。
LAL（ゲル化法）マルチタイプ各種
LAL（比濁法/ゲル化法)マルチタイプ各種（比濁法/ゲル化法の両方に使用できます）
製品紹介（迅速測定装置：Endosafe® nexgen-PTS™）
Endosafe® nexgen-PTS™は、最短15分でエンドトキシンの検出が可能な迅速試験システムです。必要な試薬（LAL試薬、合成発色基質、エンドトキシン標準品）がすべて専用カートリッジに封入されており、簡単かつ短時間でエンドトキシン試験を行うことが可能です。本システムに用いる専用カートリッジはUS FDAの認可済み（2006年7月認可取得）であり、現在の規制ガイドラインの国際調和に準拠しています。
Endosafe® nexgen-PTS™システムの特徴
- 1サンプルの測定が最短15分
- 試験毎の検量線の作成が不要（保存検量線を採用）
- 測定に必要なサンプル量は100μL
- US FDA認可取得（2006年7月）
- 21CFR Part11対応
紹介動画：Endosafe® nexgen-PTS™システム
測定原理
Endosafe® nexgen-PTS™システムはリーダー（測定部）とカートリッジ（サンプル添加部）で構成されており、各サンプルの発色強度が閾値に達するまでの時間を計測するカイネティック-比色法に基づいて設計されています。
カートリッジには4本のラインがあり、その全てに発色基質とLAL試薬が封入されています。また、4本中2本のラインにはエンドトキシン標準品が封入されており、添加回収率を計算するためのスパイクライン（positive product controls）として使用します。保存検量線を採用しているため、試験毎に検量線を作成する必要はありません。
PTSカートリッジ 模式図
測定の流れ（約4分）
Endosafe® nexgen-PTS™システム、関連試薬に関してはCharles River社ウェブサイト、製品カタログにてご確認ください。
よくあるご質問
Celsis Endosafe エンドトキシン試験に関するよくある質問はこちら
製品資料・マニュアル・CoA
製品資料・マニュアル
CoA
- こちらのサイトより、Endosafe®製品のCoAを入手できます。
Charles River社 Microbial Solutions Customer Portal
※Charles River社のサイトへ遷移します（英語）。 - CoAの検索方法
上記サイトへ遷移後、左下の「Enter Lot Number Here」にロット番号をご入力ください。
Topics - Low Endotoxin Recovery (LER) 解説記事
弊社取り扱いのEndosafe製品のメーカーでもありますCharles River Laboratories社微生物研究部門の土谷正和先生に、欧米で話題となっているLow Endotoxin Recovery（LER）について解説いただきました。
また、ご希望の方には記事の基となっている土谷先生の日本語総説の別刷りをお送りいたします。
是非、下記リンクからご覧ください。
