ラーニングコーナー
2014/08/20
週末の培地交換不要！Laminin-521でのヒトES/iPS細胞培養 ウィークエンドフリープロトコール
- 用途別細胞培養
ヒトES/iPS細胞（ヒト多能性幹細胞、hPSC）の培養プロトコールの多くは毎日の培地交換を必要とします。しかし、ヒトES/iPS細胞本来のマトリックスにもっとも近いBioLamina社のヒト組換えラミニン「Laminin-521」を培養基質に用いることで、土日の培地交換が不要になります。
「ウィークエンドフリープロトコール」について
培養基質にBioLamina社の「Laminin-521」を用いる場合のウィークエンドフリープロトコールはフレキシブルです。
平日に毎日培地交換し、木曜か金曜にシングルセル継代をおこないます。
あとは細胞株と作業スケジュールにとって最適になるよう、播種密度を調整するだけです。
木曜か金曜に継代することさえ守れば、ヒトES/iPS細胞の形態・マーカー発現・自己増殖能などを維持することが可能です。
Laminin-521を用いた「ウィークエンドフリー」プロトコールの主な特長
- 土日の培地交換不要
- フレキシブルな継代スケジュール
- 多能性と増殖速度を維持
- 簡単で信頼性の高いシングルセル継代
- Definedかつゼノフリーで、長期増殖が可能
- 低bFGF培地（4 ng/mL）でバリデート済み ※
※ 多くの培地はbFGFをより高い濃度で含みます。そのような培地（例：mTeSR1, TeSR2）を使用した場合、同等以上のパフォーマンスが期待できます。
通常プロトコールとの比較
ヒトES/iPS細胞の維持培養において毎日培地交換する通常のプロトコールと、ウィークエンドフリープロトコール（平日のみ培地交換）を比較したデータをご紹介いたします。
どちらも週2回シングルセル継代をおこなうとともに、木曜か金曜には必ず継代をおこないました。またヒトES細胞株（HS181、HS980）、iPS細胞株（C3）で6継代しました。
細胞増殖速度の比較
ウィークエンドフリープロトコール（点線）は通常プロトコール（実線）と同様の増殖速度を示しました。
多能性マーカー発現と形態の維持
ウィークエンドフリープロトコールと通常プロトコールで6継代した細胞は、いずれも均一に単層培養され、OCT-4の発現が高く、未分化細胞の形態（顕著な核小体、高い核-細胞質比）を維持していました。
